 船長（Commander）
ケント・ロミンガー
（Kent Rominger）
1956年8月7日、コロラド州生まれ。
米海軍大佐、1992年にNASA宇宙飛行士として選抜され、1993年に宇宙飛行士となる。
STS-73, 80, 85でパイロットとして搭乗し、その後、STS-96(2A.1)で船長として飛行。
STS-100は5回目の飛行となる。
|  パイロット（Pilot）
ジェフリー・アッシュビー
（Jeffrey Ashby）
1954年6月16日、テキサス州生まれ。
米空軍大佐、1994年にNASA宇宙飛行士に選抜された。
STS-93で、パイロットとして飛行。
STS-100は2回目の飛行となる。
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 ミッション・スペシャリスト（MS）
クリス・ハドフィールド
（Chris Hadfield）
1959年8月29日、カナダのオンタリオ生まれ。
カナダ宇宙機関(CSA)宇宙飛行士、カナダ空軍大佐
1992年にCSAから4人の宇宙飛行士のうちの1人として選抜され、NASA JSC勤務となる。
STS-74(ミールとのドッキングミッション)でMSとして飛行(カナダ人初のMSとなった)。
STS-100は2回目の飛行となる。
CSAの宇宙飛行士のチーフであり、CAPCOMのチーフとしても知られている。 EVA担当（カナダ人初のEVAとなる）
|  ミッション・スペシャリスト（MS）
スコット・パラジンスキー
（Scott Parazynski）
1961年7月、アーカンサス州生まれ。
医学博士（救急医療）、1992年にNASA宇宙飛行士に選抜され、1993年に宇宙飛行士になる。
STS-66, 86, 95でMSとして飛行。
STS-100は、4回目の飛行となる。
EVA担当
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 ミッション・スペシャリスト（MS）
ジョン・フィリップス
（John Phillips）
1951年4月、バージニア州生まれ。
1996年にNASA宇宙飛行士に選抜され、1998年に宇宙飛行士になる。
STS-100は初飛行となる。
|  ミッション・スペシャリスト（MS）
ウンベルト・ギドーニ
（Umberto Guidoni）
ヨーロッパ宇宙機関(ESA)宇宙飛行士
1954年8月、イタリアのローマ生まれ。
1989年にイタリア宇宙機関(ASI)のペイロードスペシャリストに選抜された。
1996年のSTS-75でPSとして飛行。1996年のNASAアスカンコースに参加し、MSの認定を受ける。
STS-100は、2回目の飛行となる。
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 ミッション・スペシャリスト（MS）
ユーリ・ロンチャコフ
（Yuri Lonchakov）
1954年3月生まれ。
ロシア空軍中佐、ロシア宇宙飛行士
1997年にロシアの宇宙飛行士候補として選抜される。
STS-100は初飛行となる。
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